如何解决色谱柱使用过程中出现的问题及?；ど字?/h1>
日期：2024-09-06 01:44
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摘要：
1.保留值与分离度重现性不好原因分析
问题 原因 表现
不同色谱柱间差异 填料、键合相不同 保留因子（k），分离因子（α）
使用期间柱变化 柱床破坏 柱效（N）
键合相丢失 保留因子（k），分离子（α）
硅胶基质溶解 柱效（N）
强保留分堆积堵塞 保留因子（k），柱效（N）
柱外效应 系统差异，进样量大、 柱效（N）
进样阀与 色谱柱之间、
色谱柱与检测器之间管
路太长、检测器流通池
体积大、接头死体积大
等。
分离效果变差 流动相组分改变 保留因子（k），柱效变化很小
流速改变 保留因子（k），分离因子（α）
温度改变 保留因子（k），柱效变化很小
柱平衡慢 重新平衡时间不够 保留因子（k），柱效变化很小
柱超载 样品量太大 保留因子（k），柱效（N）
2.造成色谱峰（不对称）拖尾的原因
1.色谱柱本身填装问题，筛板堵塞或填料塌陷；
2.柱头有污染；
3样品超载；
4样品溶剂不合适；
5.柱外效应；
6化学或二次保留（硅羟基）效应；
7缓冲容量不足或不合适；
8重金属污染。
3.如何解决峰形拖尾的问题
A．与化学有关的拖尾问题
1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用与碱性化合物）或醋酸胺（用与酸性化合物），未
知化合物加醋酸三乙胺；
2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3．降低进样量至<1ug。
B．与色谱柱有关的拖尾问题
1．如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二碌甲烷与4%甲
醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗，正向柱可用甲醇冲洗。
2．使用保护柱
C．与HPLC 系统有关的峰拖尾和峰加宽
1．进样体积过大，（通?！?5uL）；
2．进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（*佳连接管应<20cm，内径为0.007″）；
3．检测器流通池的体积过大。
4．如何储存色谱柱
1．防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制**成长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。
2．尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂（乙晴*好）中，避免在缓冲溶液中保存。
3．使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15～20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂储存。
4．避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。
5．将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。
如何选择?；ぶ?/p>
怎样选择保护柱，但又不能影响分离分析？这是色谱工作者经常提出的一个问题。通常，在选择?；ぶ笆紫纫悸堑氖茄肥欠袂褰?。对于大部分分析工作者来说，一只1cm长的?；ぶ?，那么就应选择2cm或3cm长的?；ぶ１；ぶ匠ぃ匀凰疤畹纳滋盍暇驮蕉?，则其越能避免污染物进入分析色谱柱的机会。当然，随着?；ぶ某ざ燃映ぃ返谋Ａ羰奔浠岜仁褂枚瘫；ぶ?。一般来说，?；ぶ哪诰队敕治錾字哪诰断嗤蛳嗟奔纯伞?br>
?；ぶ奶盍献疤罘绞揭埠苤匾Ｄ壳坝斜∧ぷ疤罘ǖ谋；ぶ褂霉毯芗虻シ奖?，而且可以在实验室中进行干装。但是，其*大的缺点是不经济，特别是针对中国的具体情况，一次性使用相对费用较高。另外，薄膜装填法的?；ぶ疤畹纳滋盍嫌邢?，只能提供有限的?；ぷ饔茫徊还惨蛭疤畹纳琢辖仙?，?；ぶ某ざ纫步隙?，所以对分析样品的保留时间的影响也很小。
另一种?；ぶ峁蛊涫抵适撬醵塘说纳追治鲋簦杓品绞缴嫌兄绷?、手紧式或整体式。整体式设计是由色谱的生产厂商直接安装在色谱分析柱上的，必须与色谱分析柱一同订货，可以非常方便地使用，但不能够被修改。直连式结构设计可在任何时候有色谱工作者来安装连接，可以与任何品牌的色谱分析柱连接使用，而且还可以根据样品的相关情况选择不同的?；ぶざ取Ｊ稚辖艏纯伞Ａ硗獯颖；ぶ峁褂址治欠窨梢愿槐；ぶ??？梢越档捅；ぶ氖褂贸杀尽?/p>
大多数人是根据色谱分析柱的填料选择?；ぶ奶盍?，正常情况下可以选择与分析色谱柱一样的色谱填料。但是，根据实际的分析工作，也可不必与分析色谱柱的填料完全相匹配。
对于选择?；ぶ脑蚴牵涸诼惴治龇掷胍蟮那疤崽跫拢】赡艿难≡窠隙痰谋；ぶ峁?，尽可能选择对分离样品小一些保留性的填料。
如何解决色谱柱使用过程中出现的问题及?；ど字?
1.保留值与分离度重现性不好原因分析
问题 原因 表现
不同色谱柱间差异 填料、键合相不同 保留因子（k），分离因子（α）
使用期间柱变化 柱床破坏 柱效（N）
键合相丢失 保留因子（k），分离子（α）
硅胶基质溶解 柱效（N）
强保留分堆积堵塞 保留因子（k），柱效（N）
柱外效应 系统差异，进样量大、 柱效（N）
进样阀与 色谱柱之间、
色谱柱与检测器之间管
路太长、检测器流通池
体积大、接头死体积大
等。
分离效果变差 流动相组分改变 保留因子（k），柱效变化很小
流速改变 保留因子（k），分离因子（α）
温度改变 保留因子（k），柱效变化很小
柱平衡慢 重新平衡时间不够 保留因子（k），柱效变化很小
柱超载 样品量太大 保留因子（k），柱效（N）
2.造成色谱峰（不对称）拖尾的原因
1.色谱柱本身填装问题，筛板堵塞或填料塌陷；
2.柱头有污染；
3样品超载；
4样品溶剂不合适；
5.柱外效应；
6化学或二次保留（硅羟基）效应；
7缓冲容量不足或不合适；
8重金属污染。
3.如何解决峰形拖尾的问题
A．与化学有关的拖尾问题
1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用与碱性化合物）或醋酸胺（用与酸性化合物），未
知化合物加醋酸三乙胺；
2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3．降低进样量至<1ug。
B．与色谱柱有关的拖尾问题
1．如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二碌甲烷与4%甲
醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗，正向柱可用甲醇冲洗。
2．使用保护柱
C．与HPLC 系统有关的峰拖尾和峰加宽
1．进样体积过大，（通?！?5uL）；
2．进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（*佳连接管应<20cm，内径为0.007″）；
3．检测器流通池的体积过大。
4．如何储存色谱柱
1．防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制**成长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。
2．尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂（乙晴*好）中，避免在缓冲溶液中保存。
3．使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15～20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂储存。
4．避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。
5．将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。
如何选择?；ぶ?/p>
怎样选择保护柱，但又不能影响分离分析？这是色谱工作者经常提出的一个问题。通常，在选择?；ぶ笆紫纫悸堑氖茄肥欠袂褰?。对于大部分分析工作者来说，一只1cm长的?；ぶ?，那么就应选择2cm或3cm长的?；ぶ１；ぶ匠ぃ匀凰疤畹纳滋盍暇驮蕉?，则其越能避免污染物进入分析色谱柱的机会。当然，随着?；ぶ某ざ燃映ぃ返谋Ａ羰奔浠岜仁褂枚瘫；ぶ?。一般来说，?；ぶ哪诰队敕治錾字哪诰断嗤蛳嗟奔纯伞?br>
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另一种?；ぶ峁蛊涫抵适撬醵塘说纳追治鲋簦杓品绞缴嫌兄绷?、手紧式或整体式。整体式设计是由色谱的生产厂商直接安装在色谱分析柱上的，必须与色谱分析柱一同订货，可以非常方便地使用，但不能够被修改。直连式结构设计可在任何时候有色谱工作者来安装连接，可以与任何品牌的色谱分析柱连接使用，而且还可以根据样品的相关情况选择不同的?；ぶざ取Ｊ稚辖艏纯伞Ａ硗獯颖；ぶ峁褂址治欠窨梢愿槐；ぶ??？梢越档捅；ぶ氖褂贸杀尽?/p>
大多数人是根据色谱分析柱的填料选择?；ぶ奶盍?，正常情况下可以选择与分析色谱柱一样的色谱填料。但是，根据实际的分析工作，也可不必与分析色谱柱的填料完全相匹配。
对于选择?；ぶ脑蚴牵涸诼惴治龇掷胍蟮那疤崽跫拢】赡艿难≡窠隙痰谋；ぶ峁?，尽可能选择对分离样品小一些保留性的填料。
如何解决色谱柱使用过程中出现的问题及?；ど字?
