现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但

是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。

1、正相色谱

正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica），以及其他具有极性官能团，如胺基团

(NH2,APS)和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品

中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份*先被冲洗出色谱柱。

正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯仿

（Chloroform）,二氯甲烷（Methylene  Chloride）等。

2、反相色谱

反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。

反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。

样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合*先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有

更强的保留。

常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。

二、聚合物填料

聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～

14均可使用。

相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白

质等样品的分离非常有效。

现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。

三、其他无机填料

其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般**于特殊的

用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基

键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基

键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由

于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC，

氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。

但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，

新型氧化锆填料也可用于HPLC，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应

用PH范围1～14，温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究，加之面临的实验难

度，其重要用途与优势尚在进行中。

怎样选择填料粒度

目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3um、

5um和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填

充柱的柱效越高；小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，

但不是**的因素。如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料

是很有用的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，

3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更

短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使

用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。

一、如何保证良好的柱性能与柱寿命

◆ 认证阅读色谱柱使用说明书；

◆ 使用填充良好的色谱柱；

◆ 尽量减少压力波动，避免机械及热冲击；

◆ 使用?；ぶ霸谙吖似鳎?/p>

◆ 经常以强溶剂冲洗色谱柱；

◆ 充分过滤样品及流动相，尽量避免杂质微粒与强保留成分；

◆ 用稳定的固定相（C18*稳定）；

◆ 在中等PH值操作（6~8），用有机缓冲溶液；

◆ 色谱柱使用温度*好小于40℃；

◆ 硅胶基质的的色谱柱，应保持流动相的PH值范围在3.0~8.0；

◆ 在水流动相与缓冲溶液中加200ppm的叠氮钠；

◆ 流动相中含有缓冲溶液，应注意应95∶5的水及有机溶剂过渡，有机溶剂不能低于5%；

◆ 过夜或贮存时，冲洗掉盐和缓冲液，用纯有机溶剂流动相保存（乙晴*好）。

HPLC固定相及应用范围

名称    别名      功能基团   正相  反相  离子对  应用
 
Silica                     -OH           √                         非极性和中等极性以及非离子性有机化合物。
 
SAS   C1             -(CH3)3               √                在所有的烷基键合相中对非极性化合物保留*

                                       弱，典型用于中等极性和多官能团化合物.
 
Butyl  C4              -C4H9                 √    √       分离肽和蛋白质，保留时间比C8和C18短。
 
MOS  C8，         -C8H17                 √     √      中等极性相中对中等化合物，小肽和蛋白质，

          Octyl                                                           极**族化合物和环境样品。
 
ODS  C18            -C18H37              √     √       烷基键合相中对中等极性化合物保留*强。广

                                       泛用于**，甾族化合物，脂肪酸和环境样品.
 
CPS   CN ,Cyano  -(CH2)3CN      √    √          对极性化合物有独特的选择性，适合应用于正相

(propyl                                                       分离，当用于反相系统时，其选择性与  C8和

Nitrile)                                                       C18不同，在药学领域和复杂混合物的分离中应

                                用广泛。
 
APS  NH2            -(CH2)3 NH2     √    √         反相中分析糖类和其他极性化合物。弱阴离子交

         (AminoPropyl)                                              换 ，阴离子和有机酸则应用缓冲剂和有机改性

                                       剂 做流动相。正相中与硅胶的选择性机改性剂

                                       不同,分析芳香族效果很好。
 
Phenyl                    -(CH3)C6H5             √     √  芳香族化合物
 
Diol                        -(CH2)2O      √     √      反相时，分离肽和蛋白质。正相时，与硅选择

                              CH2(CH2OH)2                                性 相似,但极性较弱。
 
SCX  强阳离子    -(CH2)2C6H4SO3H-            √  有机碱

交换
 
SAX  强阴离子     -(CH2)3N+(CH3)3　　　　　　 有机酸，核苷和核苷酸

交换